Beurteilende(r)| Name: | Ao.Univ.Prof. Dipl.-Ing. Dr.nat.techn. Florian Rüker |
| Herkunftsbetrieb: | |
| Arbeit |
| Typ der Arbeit: | Masterarbeit |
| Sprache der Arbeit: | Deutsch |
| Titel der Arbeit in Originalsprache: | Klonierung und Expression des Fab-Fragmentes des humanen monoklonalen Antikörpers 3D6 |
| Titel der Arbeit in deutsch: | Klonierung und Expression des Fab-Fragments des humanen monoklonalen Antikörpers 3D6 |
| Titel der Arbeit in englisch: | n.a. |
| Publikationsmonat: | 03.2001 |
| Seitenanzahl: | |
| Online-Katalog der Universitätsbibliothek Bodenkultur |
| AC-Nummer: | AC03172179 |
| Abstract |
| Abstract in Deutsch: | Das Gen für das Fab 3D6 wurde durch Verbindung der schweren Kette
(VH, CH1) mit der leichten Kette (Vk,Ck) über einen Linker konstruiert.
Dies und das folgende Anfügen von Restriktionsschnittstellen für SfiI und
NotI erfolgte mittels PCRs. Das Insert wurde in den Vektor pHEN1 kloniert,
in dem abwärts der 3`-Klonierungsstelle die Sequenz für ein c-myc tag
vorliegt, das mit dem Oberflächenprotein (g3p) des fd-Phagen über ein
amber stop codon verbunden ist. Die Klonierung bewirkt die Fusion von
Fab und c-myc, wodurch das Fab, abhängig von der Verwendung eines
Suppressor- oder Nichtsuppressorstammes von E. coli, entweder am Phagen
hängend oder als lösliches Fragment mit dem c-myc tag exprimiert werden
kann. Es konnte tatsächlich festgestellt werden, daß lösliches Fab in
entsprechender Menge exprimiert wird und spezifisch bindet. Weiters
konnte das Fab über das c-myc tag auf einfache und effiziente Weise
einer Affinitätsreinigung unterzogen werden.
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| Abstract in Englisch: | The gene for the fab 3D6 was constructed by connecting the heavy chain
(VH, CH1) and the light chain (Vk,Ck) with a linker. Restriction sites for
SfiI and NotI were introduced by PCR.The fab was cloned into the vector
pHEN1 which contains the sequence for a c-myc tag downstream the
restriction site for NotI. C-myc is linked with the coat protein (g3p)
of an fd phage by an amber stop codon. This cloning strategy leads to the
fusion of fab and c-myc and allows the rescue of the fab either displayed
on phage or as soluble particles depending on using either a suppressor-
or a non-suppressor strain of E. coli for expression. Indeed it was shown
that soluble fab is expressed and binds specifically. In addition, the fab
could be affinity purified easily using the c-myc tag.
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| Schlagworte |
| Schlagwörter Deutsch: | Genetik Phage display Affinität Fab-fragment 3D6 Phagmid pHEN1 |
| Schlagwörter Englisch: | BIOLOGY, GENETICS phage display phagemid pHEN1 fab-fragment 3D6 affinity |
| Sonstiges |
| Signatur: | D-9996 |
| Organisationseinheit, auf der die Arbeit eingereicht wird: | H62000 Inst.f. Angewandte Mikrobiologie (IAM) |
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