Beurteilende(r)| Name: | Ao.Univ.Prof. Dipl.-Ing. Dr.nat.techn. Florian Rüker |
| Herkunftsbetrieb: | |
| Arbeit |
| Typ der Arbeit: | Masterarbeit |
| Sprache der Arbeit: | Englisch |
| Titel der Arbeit in Originalsprache: | Production of recombinant antibody fusion proteins in Escherichia coli for the detection of plant viruses |
| Titel der Arbeit in deutsch: | n.a. |
| Titel der Arbeit in englisch: | Production of recombinant antibody fusion proteins in Escherichia coli for the detection of plant viruses |
| Publikationsmonat: | 10.2002 |
| Seitenanzahl: | |
| Online-Katalog der Universitätsbibliothek Bodenkultur |
| AC-Nummer: | AC03612600 |
| Abstract |
| Abstract in Deutsch: | Für die Detektion von Pflanzenviren mittels ELISA stellen, wie bereits gezeigt wurde, rekombinante single-chain Antikörperfusionsproteine eine attraktive Alternative zu monoklonalen Antikörpern oder polyklonalen Antiseren dar. Ein Vorteil gegenüber den herkömmlichen Methoden der Antikörperproduktion mittels Immunisierung von Tieren oder mittels Hybridom-Technik ist die Möglichkeit, diese Reagenzien schnell, billig, reproduzierbar und in großem Maßstab durch einfache bakterielle Fermentation herzustellen. Im Rahmen eines Demonstrationsprojektes der Europäischen Union wurden im Versuchsmaßstab Protokolle zur Produktion eines Detektionsreagens für ELISA erstellt. Dieses Fusionsprotein, bestehend aus einem scFv, fusioniert an eine alkalische Phosphatase, dient zum Nachweis des Pflanzenvirus beet necrotic yellow vein virus (BNYVV) in einem double antibody sandwich ELISA. Durch batch-Fermentation in Escherichia coli konnten Erträge von bis zu 80 mg pro Liter erzielt werden, wobei das Protein in seiner löslichen, aktiven Form vorlag. Die Reinigung erfolgte in zwei Schritten durch Metallchelatchromatografie (IMAC). Löslichkeit und enzymatische Aktivität blieben auch nach der Lyophilisation erhalten. Weiters wurden Vektoren zur Expression eines BNYVV-ELISA coating Reagens sowie eines potato leafroll luteovirus (PLRV) detektierenden Reagens getestet und hinsichtlich höherer Plasmidstabilität verbessert. Die hier gezeigten Ergebnisse demonstrieren die Eignung von Escherichia coli zur Expression rekombinanter Antikörper und betonen weiters die Bedeutung der Optimierung von Induktionsparametern für die Ertragssteigerung. |
| Abstract in Englisch: | Recombinant single-chain antibody fusion proteins have previously been shown to be an attractive alternative to monoclonal antibodies or polyclonal antisera when establishing routine ELISAs for the detection of plant viruses. The possibility to produce them quickly, inexpensively, reproducibly and in large scale by simple bacterial fermentation offers a striking advantage over conventional methods of antibody production by immunization of animals or by hybridoma cultures. In the framework of a demonstration project funded by the European Union protocols for the pilot scale production of a recombinant detecting reagent for ELISA were established. The reagent consists of an scFv fused to alkaline phosphatase and detects beet necrotic yellow vein virus (BNYVV) in a double antibody sandwich ELISA. Batch fermentation in Escherichia coli yielded up to 80 mg of the fusion protein per litre in soluble and active form and purification was successfully achieved using two steps of immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC). Solubility and enzymatic activity of the protein were retained after lyophilisation. Furthermore, vectors for the expression of a BNYVV-ELISA coating reagent as well as for a reagent detecting potato leafroll luteovirus (PLRV) were tested and improved to give a higher plasmid stability during induction of protein expression. The results presented here demonstrate the suitability of Escherichia coli as expression host for recombinant antibodies and also emphasize the importance of optimizing induction parameters to obtain satisfactory yields. |
| Schlagworte |
| Schlagwörter Deutsch: | Mikrobiologie Antikörper-Fragmente Fusionsproteine scFv bakterielle Expression |
| Schlagwörter Englisch: | BIOLOGY, MICROBIOLOGY antibody fragments fusion-proteins scFv bacterial expression |
| Sonstiges |
| Signatur: | D-10998 |
| Organisationseinheit, auf der die Arbeit eingereicht wird: | H62000 Inst.f. Angewandte Mikrobiologie (IAM) |
Zurück zur Auswahl der Arbeiten
