| AutorIn | | Name: | MAG. Andreas Bernreiter | 1.Beurteilende(r)| Name: | Mag.rer.nat. Univ.Doz. Dr.rer.nat. Joseph Strauss | | Herkunftsbetrieb: | | | Arbeit | | Typ der Arbeit: | Dissertation | | Sprache der Arbeit: | Englisch | | Titel der Arbeit in Originalsprache: | Isolation and characterization of a nuclear pore protein involved in the regulated transport of the nitrate assimilation cluster specific transcription factor NirA | | Titel der Arbeit in deutsch: | n.a. | | Titel der Arbeit in englisch: | Isolation and characterization of a nuclear pore protein involved in the regulated transport of the nitrate assimilation cluster specific transcription factor NirA | | Publikationsmonat: | 04.2005 | | Seitenanzahl: | 120 | | Online-Katalog der Universitätsbibliothek Bodenkultur | | AC-Nummer: | AC04517947 | | Abstract | | Abstract in Deutsch: | Der filamentöse Pilz Aspergillus nidulans ist einausgezeichneter Modell-Organismus um grundlegende physiologische oder entwicklungsgenetische Prozesse in Eukaryonten zu untersuchen. Nitrat ist eine der häufigsten Stickstoffquellen in aquatischen und terrestrischen Ökosystemen und wird von Pflanzen und Mikroben verwertet. Die Regulation dieser Nitratassimilation ist zur Zeit in A. nidulans am besten untersucht. Das Ziel dieser Arbeit war die Identifizierung von Proteinen die mit NirA, dem nitratspezifischen Transkriptions-Aktivator, interagieren, Dieses DNA-Bindungsprotein ist durch einen von der verfügbaren Stickstoffquelle gesteuerten Zellkern Import/Export reguliert. Mittels des ¿Hefe-Zwei-Hybrid¿ Selektiosassays wurde eine Interaktion von NirA mit einem Bestandteil des Kernporenkomplexes gefunden. Nachdem jedoch keine direkte Interaktion zwischen NirA und dem Nucleoporin (wurde als NplA bezeichnet) in vitro gezeigt werden konnte, wurde die Hypothese verfolgt, daß die Interaktion indirekt sein könnte und eine molekulare Brücke benötigt, die zwischen Saccharomyces cerevisiae und Aspergillus nidulans konserviert ist. Der Kern-Export Faktor Crm1 wurde als solche molekulare Brücke für die NirA/NplA Interaktion identifiziert. KapK, das Crm1 homologe Protein in Aspergillus nidulans, interagiert sowohl mit NirA als auch mit NplA. Mutationen in dem Nukleären Expoprt Signal (NES) von NirA, welche die Interaktionsdomäne von NirA mit KapK darstellt, verhindern diese Interaktion. Dementsprechend konnte auch gezeigt werden dass die genetisch isolierte nirAc1 Mutation, die zu einer Nitrat-unabhängigen Aktivierung der Assimilationsgene führt, eine Mutation im NES darstellt, welche weiters eine konstitutive Akkumulation von NirA im Zellkern bewirkt. | | Abstract in Englisch: | The filamentous fungus Aspergillus nidulans is a favored model organism to study fundamental physiological and developmental processes in eukaryotes. Nitrate is one of the most abundant nitrogen sources in nature assimilated by plants and microbes and the regulation of this process is currently best understood in A. nidulans. The main objective of this work was to find proteins interacting with NirA, the nitrate assimilation cluster specific transcription factor. This DNA-binding protein is regulated by active nuclear import/export events in response to differing nitrogen sources. A yeast-two-hybrid screen revealed the interaction of NirA with a component of the nuclear pore complex. But since no direct interaction between NirA and the nucleoporin, termed NplA, could be shown in vitro, the hypothesis arose that the interaction is indirect and might involve a molecular bridge conserved between Saccharomyces cerevisiae and Aspergillus nidulans. Nuclear export factor Crm1 was shown to be the bridging factor for NplA/NirA interaction. The Crm1 homologue in Aspergillus nidulans, termed KapK, interacts in the two hybrid system with both NirA and NplA. Moreover, mutations in the nuclear export signal (NES) of NirA representing the interaction site of NirA with KapK, abolish the interaction between NirA and NplA. Consistent with this, a genetically selected mutation termed nirAc1, leading to nitrate-independent activation of the assimilatory enzymes, is located in the NES of NirA and leads to retention of NirA in the nucleus in vivo. A Leptomycin assay revealed that NirA is exclusively exported, from the nucleus into the cytoplasm, by KapK. NplA was further shown to permanently localize to the nucleus, to possess transcriptional activation potential by itself and, due to redundant functions in the cell, deletion of this gene was not lethal but produced a pronounced general growth suppression. | | Schlagworte | | Schlagwörter Deutsch: | Genetik Nitrat Molekularbiologie Aspergillus Kernporenkomplex | | Schlagwörter Englisch: | BIOLOGY, GENETICS nitrate molecular biology Aspergillus nuclear pore complex | | Sonstiges | | Signatur: | D-12145 | | Organisationseinheit, auf der die Arbeit eingereicht wird: | H95400 keine Angabe | |
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