Beurteilende(r)| Name: | Margit Sara |
| Herkunftsbetrieb: | |
| Arbeit |
| Typ der Arbeit: | Masterarbeit |
| Sprache der Arbeit: | Englisch |
| Titel der Arbeit in Originalsprache: | Heterologous expression and localization of a putative pyruvyl ransferase, as well as heterologous expression and characterization of a putative autolysin of Bacillus sphaericus CCM 2177 |
| Titel der Arbeit in deutsch: | n.a. |
| Titel der Arbeit in englisch: | Heterologous expression and localization of a putative pyruvyl transferase, as well as heterologous expression and characterization of a putative autolysin of Bacillus sphaericus CCM 2177 |
| Publikationsmonat: | 10.2005 |
| Seitenanzahl: | |
| Online-Katalog der Universitätsbibliothek Bodenkultur |
| AC-Nummer: | AC04869329 |
| Abstract |
| Abstract in Deutsch: | Das S-Schicht Protein SbpA assembliert an der Zelloberfläche von Bacillus sphaericus CCM 2177 in ein quadratisches (p4) Gitter, wobei pyruvyliertes sekundäres Zellwandpolymer (SCWP) als Ankermolekül zwischen S-Schicht-Subeinheiten und der festen Zellwand fungiert. Ausgehend vom S-Schicht Gen sbpA wurden 8,004 bp sequenziert. Die Analyse der 5¿- upstream Region führte zu fünf offenen Leserahmen (ORFs), die Enzyme kodieren, deren Wirkungsbereich im Zellwandmetabolismus liegt. Sequenzvergleiche von ORF1 zeigten gute Übereinstimmungen mit Zellwand-hydrolasen (Autolysinen) verschiedener Organismen. Darüber hinaus konnten in der N-terminalen Region des von ORF1 kodierten Proteins drei S-Schicht homologe (SLH) Motive identifiziert werden. Nach Klonierung und heterologer Expression von ORF1 wurde das rekombinant hergestellte Autolysin (rAbpA) isoliert und gereinigt. Trotz des Vorhandenseins der SLH-Motive zeigte rAbpA weder Affinität zu peptidoglykan-haltigen Sacculi, noch zum isolierten SCWP von B. sphaericus CCM 2177. An Hand von Extraktionsversuchen konnte das Autolysin jedoch in der rigiden Zellwandschicht von B. sphaericus CCM 2177 nachgewiesen werden. Da rAbpA ganze Zellen von B. sphaericus CCM 2177 nur nach kompletter Extraktion der S-Schicht lysierte, scheint es naheliegend, dass das Autolysin mit einem Molekulargewicht von 57 kDa vom S-Schicht Gitter, dessen Molekulargewichtstrenngrenze zwischen 30 und 40 kDa liegt, zurückgehalten wird. ORF5, der ein 360 Aminosäuren langes Protein kodiert, zeigte hohe Identität zu Pyruvyltransferasen verschiedener Organismen. Nach Klonierung und Expression wurde das rekombinant hergestellte Protein rCsaB isoliert, gereinigt und die Sekundärstruktur mittels Zirkulardichroismus bestimmt, wodurch die richtige Faltung bestätigt werden konnte. Immunogold-Markierungen von Ultradünnschnitten von ganzen Zellen von B. sphaericus CCM 2177, sowie die Untersuchung von verschiedenen Zellfraktionen ergaben, dass CsaB im Cytoplasma lokalisiert ist. Dieses Ergebnis stimmte mit dem Fehlen einer typisch gram-positiven Signalsequenz gut überein. |
| Abstract in Englisch: | The S-layer protein SbpA of Bacillus sphaericus CCM 2177 assembles into a square (p4) lattice structure and recognizes a pyruvylated secondary cell wall polymer (SCWP) as the proper anchoring structure to the rigid cell wall layer. Sequencing of 8,004 bp in the 5¿-upstream region of the S-layer gene sbpA led to five open reading frames (ORFs) encoding enzymes involved in cell wall metabolism. After cloning and heterologous expression of ORF1 which revealed high identity to cell wall hydrolases, the recombinant autolysin rAbpA was isolated and purified. Despite the presence of three S-layer-homology (SLH) motifs, rAbpA neither bound to peptidoglycan-containing sacculi, nor to the isolated SCWP. As extraction experiments revealed that the autolysin was located in the rigid cell wall layer, and rAbpA lysed whole cells of B. sphaericus CCM 2177 only after complete removal of the S-layer, it is evident that this autolysin with a molecular mass of 57 kDa is trapped in the rigid cell wall layer by the S-layer lattice with a molecular mass cut off of 30 to 40 kDa. The fifth ORF which encoded a 360 amino acids long protein showed high identity to pyruvyl transferases. After cloning and heterologous expression, rCsaB was isolated and purified, and circular dichroism measurements confirmed correct folding. Immunogold-labelling of ultrathin-sectioned whole cells of B. sphaericus CCM 2177 and cell fractionation experiments demonstrated that CsaB was located in the cytoplasm, which was consistent with the absence of a gram-positive signal sequence peptide. |
| Schlagworte |
| Schlagwörter Deutsch: | Mikrobiologie Sekundäres Zellwandpolymer Bacillus sphaericus CCM 2177 Autolysin AbpA Pyruvyl Transferase |
| Schlagwörter Englisch: | BIOLOGY, MICROBIOLOGY secondary cell wall polymer Bacillus sphaericus CCM 2177 autolysin AbpA pyruvyl transferase |
| Sonstiges |
| Signatur: | HB: D-12425 |
| Organisationseinheit, auf der die Arbeit eingereicht wird: | H72000 Inst.f. Freiraumgestaltung und Landschaftspflege (IFL) |
Zurück zur Auswahl der Arbeiten
