Beurteilende(r)| Name: | Ao.Univ.Prof. Dipl.-Ing. Dr.rer.nat. Gerhard Adam |
| Herkunftsbetrieb: | |
| Arbeit |
| Typ der Arbeit: | Masterarbeit |
| Sprache der Arbeit: | Englisch |
| Titel der Arbeit in Originalsprache: | Molecular biological tools for the new fungus species Trichosporon mycotoxinivorans |
| Titel der Arbeit in deutsch: | Molekularbiologische Werkzeuge für die neue Pilzspezies Trichosporon mycotoxinivorans |
| Titel der Arbeit in englisch: | Molecular biological tools for the new fungus species Trichosporon mycotoxinivorans |
| Publikationsmonat: | 10.2008 |
| Seitenanzahl: | 96 |
| Online-Katalog der Universitätsbibliothek Bodenkultur |
| AC-Nummer: | AC07127778 |
| Abstract |
| Abstract in Deutsch: | Der Pilz Trichosporon mycotoxinivorans (MTV) ist eine neue Spezies der Gattung Trichosporon. Von Interesse ist die durch Molnar et al. (2004) nachgewiesene Fähigkeit des Stammes, Zearalenon und andere Mykotoxine entgiften zu können. Die Sekundärmetaboliten von Pilzen stellen eine große Gefahr für die Gesundheit von Mensch und Tier dar und verursachen große Probleme in der Landwirtschaft. Zum Studium der Mechanismen des Toxinabbaus sollten für MTV molekularbiologische Werkzeuge entwickelt werden. Ein Ziel dieser Diplomarbeit war die Etablierung eines Transformationssystems. Als erstes wurde die Agrobacterium vermittelte Transformation versucht, wobei unterschiedliche Drogenresistenzmarker zur Selektion eingesetzt wurden. Da keiner der Marker adäquat für die Selektion von MTV Transformanten war, sollten Auxotrophiemutanten entwickelt werden. Aus einem Pool an bestrahlten MTV Zellen konnten einige nicht revertierende Auxotrophiemutanten identifiziert werden. Die Adenin defiziente Mutante MTV-15C1 wurde für Transformationsversuche ausgewählt. Nach mehreren Tagen auf Medium ohne Adenin verfärbten sich die Kolonien rot. Der rote Farbstoff wird aufgrund eines Defektes im ade1 oder ade2 Gen akkumuliert und kann nicht weiter metabolisiert werden. Mittels Komplementierung der MTV-Mutante mit den entsprechenden ADE Genen der sequenzierten Basidiomyceten Ustilago maydis und Cryptococcus neoformans sollte der Defekt behoben werden. Mit ADE2 von U. maydis im Vektor pPZP-NEO1 wurden Transformationsversuche der MTV-Mutante mittels Protoplastierung und Elektroporation durchgeführt. Schließlich wurde eine Lambda Genbank mit genomischer DNA von MTV erstellt. Die Genbank wurde nach dem Arginin-Biosynthesegen argA gescreent. Zwei Klone, die das gesuchte Gen enthielten, konnten isoliert werden und mittels Primer walking wurde versucht, einen Promotor von MTV zu identifizieren. |
| Abstract in Englisch: | The fungus Trichosporon mycotoxinivorans is a new species of the genus Trichosporon. It is of interest due to the demonstrated ability (Molnar et al., 2004) to detoxify zearalenone and other mycotoxins. The secondary metabolites of fungi pose a threat for the health of humans and animals and cause great problems in agriculture. Molecular biological tools should be developed to allow investigations of the ZON degradation pathway. One goal of this diploma thesis was to establish a transformation system for MTV. First, Agrobacterium - mediated transformation was tried using different drug resistance markers for selection. Since none of the markers was adequate for selection of MTV transformants, auxotrophic mutants should be developed. Out of a pool of irritated MTV cells, several auxotrophic mutants could be identified. MTV-15C1, an ade deficient mutant developing red colonies after a few days on medium with limiting adeneine, was selected for transformation tests. A red pigment is accumulated because of a defect in the genes ade1 or ade2. The defect should be repaired by complementation of the MTV-mutant with the corresponding ADE genes of the sequenced basidiomycetes Ustilago maydis and Cryptococcus neoformans. With ADE2 of U. maydis in the vector pPZP-NEO1 transformation tests of the MTV mutant by protoplasting and electroporation were done. Finally, a lambda library with genomic DNA of MTV was created using the λBlueSTAR vector system. The library was screened for the gene argA which is part of the arginine biosynthesis. Two clones containing the gene could be isolated and by primer walking it was tried to identify a promoter of MTV. |
| Schlagworte |
| Schlagwörter Deutsch: | Trichosporon mycotoxinivorans
Zearalenon
Detoxifikation
Transformationsversuche
Identifikation von Auxotrophiemutanten
Entwicklung einer genomischen Genbank |
| Schlagwörter Englisch: | Trichosporon mycotoxinivorans
Zearalenone
Detoxification
Transformation
Auxotrophic mutants
Genomic Library |
| Sonstiges |
| Signatur: | D-13708 |
| Organisationseinheit, auf der die Arbeit eingereicht wird: | H95400 keine Angabe |
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